EB病毒诊断之抗体谱,抗原选择有讲究

添加时间:2021年5月17日

编者按:

EB病毒感染在世界范围内广泛分布,其感染机体后潜伏在宿主细胞中,当宿主的免疫系统受损时被重新激活。

COVID-19肆虐全球已一年有余,随着对SARS-CoV-2研究的深入,科学家发现感染SARS-CoV-2会导致人体免疫力下降。另外,诸如EB病毒激活会影响CoVID-19的治疗,EB病毒和SARS-CoV-2协同作用会提高病死率等见诸报道。我们相信,在科研工作者的持续努力下,这些难题可以一一得到解决。当前,在感染SARS-CoV-2会导致人体免疫力下降背景下,应更加重视潜伏感染类病毒(如EB病毒)的防治。

EB病毒的流行病学及实验室诊断

EB病毒的感染非常普遍。WHO官方数据显示,全球有约95%的成年人感染EB病毒。不仅是成年人,未成年人尤其是儿童受EB病毒的影响更大。由于免疫系统尚未发育成熟,未成年人感染EB病毒后更大几率引发严重疾病。研究发现,在发展中国家原发性EB病毒感染通常在儿童时期以无症状或临床上非特异性的方式发生。中国儿童EB病毒血清阳性率3岁以前超过50%,在8岁以后超过90%。

 

EB病毒原发感染后建立终身潜伏感染,在特定情况下可被激活并大量增殖。上文提到的机体免疫系统受损就是重要的激活因素之一。EB病毒原发感染或复发感染均可引发不同的疾病。关于EB病毒诊疗指南或专家共识均肯定血清学检测的重要作用。通过检测特异性抗体谱来判断疾病种类。如1

表1:EB病毒特异性抗体谱及疾病种类判断

(根据《EB病毒感染实验室诊断及临床应用专家共识(2018)》整理)

EB病毒血清学诊断---特异性抗体谱

由前文可见,EB病毒的血清学诊断依赖特异性抗体普,联合检测多个标志物,综合判断疾病的种类和感染状态。这有别于其他病原体的临床诊断——通过单个标志物的特异性抗体(IgG/IgM/IgA)来判断。在EB病毒的临床诊断中,同时检测患者血清中数种EB病毒特异性抗体,可以提高诊断原发性EB病毒感染的敏感性和特异性,帮助判断原发性EB病毒感染、既往感染或既往EB病毒感染再激活。如2

表2:EB病毒特异性抗体谱判断机体免疫状态

(根据《EB病毒感染实验室诊断及临床应用专家共识(2018)》整理)

  为了更直观地理解EB病毒的特异性抗体谱,我们找到EB病毒的血清抗体动力学图。如1。机体感染EB病毒后,B淋巴细胞被激活并转化为浆细胞,分泌各种抗病毒抗体。病毒衣壳蛋白(VCA)在病毒增殖时期表达,与病毒的复制有关。其VCA-IgM抗体在感染开始阶段出现,一般2-3个月消失。由于VCA-IgM抗体呈短暂出现,通常认为其是EB病毒急性感染的标志性抗体。而VCA-IgG抗体也在感染开始阶段随VCA-IgM抗体出现,但其可在体内持续存在多年或终生,因此不能用于区分急性感染或既往感染。EB病毒核蛋白(EBNA)在原发感染的恢复期产生,EBNA-IgG抗体阳性常被认为是既往感染的特定指标。另外,病毒早期蛋白(EA)在病毒增殖时期表达,与病毒的复制有关。EA-IgG抗体在VCA-IgMVCA-IgG抗体之后出现,达峰值后持续几周,可以作为急性感染(包括原发感染晚期及既往感染再激活)的诊断指标。

图1:EB病毒血清抗体动力图

EB病毒检测试剂的抗原选择

对于EB病毒检测试剂开发,正确选择抗原种类是前提。

EB病毒可编码多种结构蛋白,包括VCAEAEBNA等。当前对EB病毒感染机制研究较深入。研究发现,机体感染EB病毒后,主要针对VCAEAEBNA三种蛋白产生免疫应答。2EB病毒的蛋白质图谱。研究发现,VCA-p18VCA-p23EA-p54EA-p138EBNA-p72是主要引起免疫应答的病毒蛋白,适合用于疾病诊断。

图2:EB病毒的蛋白质图谱

 VCA抗原选择上,检测特异性IgGIgM有不同的蛋白使用策略。VCA-p18在人体中具有高度免疫原性,并包含羧基区域呈现的B细胞表位。VCA-p23可在血清学分析中显示VCA抗体谱。有研究发现,P18用于检测IgMP18+P23用于检测IgG,其效果更佳。如3

图3:EB病毒VCA蛋白的选择

此外,EA-p54EA -138联合使用,EBNA-p72单独使用,这两组抗原的免疫反应性也被证明具有较高的灵敏度。如4

图4:EA-p54+138和EBNA-p72蛋白的反应性

总结

EB病毒的实验室诊断依赖于特异性抗体谱。正确选择蛋白种类是检测试剂盒开发的必要条件。VCAEAEBNA是主要引起免疫应答的病毒蛋白。为了达到最佳的使用效果,推荐VCA-p18用于检测特异性IgMVCA-p18+p23用于检测特异性IgGEA-p54+p138用于检测特异性IgGEBNA-p72用于检测特异性抗体。

参考文献
1.Serological diagnosis of Epstein-Barr virus infection: Problems and solutions.
2.Diagnosis of Epstein-Barr virus-related diseases.
3.Routine Epstein-Barr Virus Diagnostics from the Laboratory Perspective: Still Challenging after 35 Years.
4.Clinical manifestations and treatment of Epstein-Barr virus infection.
5.EB病毒感染实验室诊断及临床应用专家共识(2018)。

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