肺炎衣原体在血清学检测的启示及抗原选择(呼吸道系列二)

添加时间:2020年5月21日

01 疾病速览

肺炎衣原体(Chlamydia pneumoniae, Cpn)是一种可以引起呼吸道感染和非典型肺炎的病原体。1965年,第一株Cpn(TW-183)从中国台湾儿童的眼结膜中被分离出来,1989年被命名为Cpn,并定为衣原体属的一个新种。 Cpn感染全球普遍存在,四季均可发病,据统计,国内呼吸系统感染患者血清中肺炎衣原体抗体阳性检出率高达22.8%-55.8%,远高于其他国家。 流行病学调查结果显示,肺炎衣原体是我国成人社区获得性肺炎(Community acquired pneumonia,CAP)的主要病原体之一,占肺炎发生率的20%-30%。小儿衣原体肺炎约占小儿肺炎的20%,国外文献报道,肺炎支原体的感染率为4%-28%。

02 临床表现

肺炎衣原体感染的潜伏期为15-23 d,临床表现为胸部异常、咽痛、干咳以及发热,无特异性症状,部分患者可以自愈。 伴随病情加重,会引发并发症,包括脑炎、心肌炎、哮喘和关节炎等。研究表明,由肺炎支原体引起的肺炎患者比其他类型细菌性肺炎患者更易患咽喉炎。 肺炎衣原体感染引起的重症病例数逐年增加,疾病早期无特异性症状,因此,对此类疾病的早期检查和发现变得尤为重要。

03 实验室诊断技术

肺炎衣原体诊断方法主要分三类:病原学、PCR法和血清学检测。 病原体分离培养中,肺炎衣原体需寄生在活体细胞内,过程易受细胞污染影响,出现假阴性。 PCR法灵敏度较高,可达几个或数十个拷贝数,但其灵敏性和特异性仍须进一步改善。 血清学检测是目前临床诊断肺炎衣原体感染最常用的方法。使用抗原检测血清中存在的特异性IgG、IgM和IgA,可以判断是近期感染、现症感染或既往感染。因此,本文将Cpn在血清学检测的研究进展及应用价值论述如下:

3.1  MIF试验

用抗原或抗原免疫小鼠、兔等制备的单克隆抗体包被ELISA 板,用酶标记抗原或抗体,在酶与底物反应发生颜色变化后,与阳性对照、阴性对照进行比色,读取相应波长下的吸光度值,进而判定阴阳性。其颜色变化程度与待测抗原或抗体的含量成正比,因此可以对其定量或半定量。 自2005年,ELISA 方法开始商业化应用,如今已被广泛应用于临床筛检与科研。2012 年,Zhou 等以主要外膜蛋白的可变域VD2 和VD3 为包被抗原,建立了3 组可以检测咽拭子标本的ELISA 方法,并与以全菌抗原ER为包被抗原的ELISA方法对比,其灵敏度和特异度最高达91.67% 和100%。

3.4  侧向免疫层析

侧向免疫层析技术是近年来发展比较快速的一种固相标记免疫测定技术。在李少巡的报告中,金标法检测肺炎衣原体抗体IgG/IgM的结果与临床最终综合诊断结论高度吻合(94.50 %),对临床相关诊断有很大的帮助(见表2)。与此同时,在李轶的研究中,同样证实了金标法检测肺炎衣原体抗体的临床应用价值。 该方法操作简单,不需要特殊设备,操作人员也不需要特殊的培训,结果在短时间内即可肉眼直接观察,适合各大医疗机构门诊及快速检测。

3.5  化学发光

化学发光法(CLIA)是以化学发光剂作为标记物,当标记上的化学发光分子被氧化时,便释放出大量光子,通过其光强度的测定从而达到定量分析的目的。根据目前已获NMPA注册证的肺炎衣原体试剂产品来看,已获IgM项目检测的CLIA厂家只有3家,而IgG只有1家(见表3);对于CLIA在Cpn抗体检测中的作用缺乏研究。从周湧的化学发光法检测肺炎衣原体IgG和IgM抗体的性能研究中,CLIA检测Cpn抗体的各项指标均符合临床要求。 基于CLIA灵敏度高、检测范围宽等优点,化学发光法在检测Cpn抗体具有较大潜力。
随着科技的迭代更新,实验室诊断技术不断发展,血清学检测在免疫学领域的研究中仍然发挥着不容忽视的作用。目前临床诊断Cpn感染主要依靠血清学方法,现阶段的临床应用主要以ELISA、POCT、CLIA等方法学为主,广泛应用于不同的医疗机构及场景。

总结:

肺炎衣原体是胞内寄生的革兰氏阴性菌,具有独特的生命周期。肺炎衣原体原生小体(EB)感染宿主细胞后,发育成代谢活跃的网状体(RB),然后二分裂繁殖出大量的EB,细胞破裂后释放,继续感染新的宿主细胞。 外膜蛋白(OMP)是肺炎衣原体的主要保护性蛋白,包括三种:主要外膜蛋白(MOMP,也称外膜蛋白A)、富含半胱氨酸大蛋白和富含半胱氨酸小蛋白。 其中,MOMP在EB和RB中均存在,约占外膜蛋白总量的60%,是用于肺炎衣原体诊断的最佳抗原。 此外,有研究表明,用变性或重组的MOMP作为疫苗免疫动物,只能提供部分保护作用,效果不及富含天然MOMP的疫苗。 血清学检测方法主要应用的抗原为Cpn全菌抗原和属抗原(脂多糖和外膜蛋白)。德国维润赛润Cpn抗原均为天然蛋白抗原,在de Ory 等的研究中,德国维润赛润公司的抗原进行非典型病原体(支原体属、衣原体属)检测对比,检测结果的相关性为100%,突显维润赛润非典型病原体(支原体属、衣原体属)抗原的卓越性,除此之外,德国维润赛润原料非常适用于ELISA、POCT、CLIA等方法学检测Cpn的需求。

产品信息

BA1371VSER      肺炎衣原体抗原          Chlamydiapneumoniae Antigen  ▶天然蛋白,菌株TW-183。 ▶有效期,≤-65℃,≥10年。 ▶可用于免疫测定。 BA1371VS    肺炎衣原体抗原(优级)       Chlamydiapneumoniae Antigen (Premium) ▶天然蛋白,菌株TW-183。 ▶有效期,≤-65℃,≥10年。 ▶富含原生小体(EB)和网状小体(RB)的外膜蛋白(MOMP)。 ▶可用于检测特异性IgG、IgM、IgA。 MAB1371.001   抗肺炎衣原体人源化单克隆抗体 IgM     Anti-Chlamydia pneumoiae  IgM ▶人源化单克隆抗体,IgM。 ▶有效期,≥2年。 ▶可用于参考品(质控品、校准品、标准品)、诊断原料。

产品优势

★质量体系: DIN EN ISO 13485;欧盟指令98/79/EC。 ★技术优势: BSL-3实验室;天然蛋白、重组蛋白;优选宿主和表达系统。 ★应用范围: 适用于LF、CLIA、ELISA、IFA等免疫检测平台。 ★产能保证: 业化量产,稳定供应。